多肽合成儀是指用來(lái)合成多肽的儀器,因?yàn)槎嚯暮铣傻牟襟E很繁瑣,又很耗時(shí),多家公司開(kāi)發(fā)了自動(dòng)多肽合成儀。 一般分為兩類(lèi),一類(lèi)是針對(duì)數(shù)量少但合成量大的生產(chǎn)型應(yīng)用,典型代表是美國(guó)ABI公司的多肽合成儀,其反應(yīng)器轉(zhuǎn)動(dòng)方式有別于前兩代的多肽合成儀,即反應(yīng)器上方相對(duì)固定,而下方作圓周360度快速旋轉(zhuǎn),帶動(dòng)反應(yīng)器里的固液兩相從底部向上作螺旋運(yùn)動(dòng),一直達(dá)到反應(yīng)器的最上方;
另外一類(lèi)多肽合成儀針對(duì)于藥物研發(fā)、基因研究等科研性應(yīng)用,典型代表是德國(guó)公司系列,可以同時(shí)提供固相合成和膜合成的應(yīng)用,并能自動(dòng)幫助客戶(hù)進(jìn)行圖譜篩選同時(shí)完成高通量的多肽合成工作。
接下來(lái)讓我們?cè)诹私庖幌露嚯暮铣蓛x的運(yùn)行原理吧
多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理,在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應(yīng)、合成,操作最終得到多肽載體。
固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生,參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的。羧基端是游離的,并且在反應(yīng)之前必須活化。
固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢(shì),現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,但對(duì)于某些短肽,tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢(shì)仍然被很多企業(yè)所采用。
具體合成由下列幾個(gè)循環(huán)組成:
1) 去保護(hù):Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護(hù)基團(tuán)。
2)激活和交聯(lián):下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?;罨膯误w與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
3) 洗脫和脫保護(hù):多肽從柱上洗脫下來(lái),其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑(TFA) 洗脫和脫保護(hù)。