多肽合成儀的問世大大促進了多肽科學的發(fā)展。反過來,隨著多肽科學的發(fā)展,科學家也對合成儀提出了更高的要求,從而帶動了合成儀的發(fā)展。
目前多肽合成儀品種繁多,從合成量上分,可分為微克級的,毫克級的,克級的和公斤級的;從功能上分,可分為研究型的,小試型的,中試型的,普通生產(chǎn)型的和GMP生產(chǎn)型的;
從自動化程度上分,可分為全自動的,半自動的和手動的;從通道上分,可分為單通道的和多通道的;從技術(shù)角度上分,可分為第一代的,第二代的,和第三代的;等等。
多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。
為了防止副反應的發(fā)生,參加反應的氨基酸的側(cè)鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。
由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢,現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,但對于某些短肽,tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢仍然被很多企業(yè)所采用。
具體合成由下列幾個循環(huán)組成:
1) 去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護基團。
2) 激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應交聯(lián),形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應完成。循環(huán):這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。
3) 洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA) 洗脫和脫保護。