多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。
為了防止副反應的發(fā)生,參加反應的氨基酸的側(cè)鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢,現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,但對于某些短肽,tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢仍然被很多企業(yè)所采用。
多肽合成儀用于合成各種蛋白質(zhì)與多肽,進行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能以及體外相互作用、免疫學等方面的研究。下面舉例說明多肽合成儀的應用。 一、合成漢坦病毒核衣殼蛋白抗原多肽片段
利用多肽合成儀合成漢坦病毒核衣殼蛋白(aal7~66)50個氨基酸殘基的核心序列,以此為抗原,建立了新型的特異性檢測抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的酶聯(lián)免疫方法。該方法特異性強,靈敏度高,簡便易行,適合基層醫(yī)療單位進行診斷。
二、用于多肽類藥物的研制
新的活性肽不斷發(fā)現(xiàn)對揭開生命奧秘如細胞分化、免疫防御、腫瘤、衰老、生殖、分子進化等以及激素功能有了更深層次的認識。利用多肽合成儀可以快速獲取活性最佳的多肽,加速多肽藥物開發(fā)。
此外,多肽合成儀為組合化學方法的建立奠定了基礎,可用于合成肽組合庫的合成,為組合化學的發(fā)展做出了重大貢獻。